发酵行业染菌问题的汇总和处理方案
01
发酵罐污染杂菌后，可能会发生以下几种异常情况：
1.罐温升高
2.pH值急剧变化
3.菌丝粘度变稀
4.化学测定的糖、氮、效价发生异常
5.发酵液产生异味
6.泡沫增多且不易消除
02
人
1.消毒工无菌意识差，对单罐批检修不到位或者漏检造成单罐批染菌。
2.设备陈旧老化员工对一些渗漏点不能及时发现。
3.公共系统查未按规定周期检修或者操作不当造成系统污染检修未按SOP操作。
4.存在死角导致消毒不彻底。
5.员工自认为熟练的情况下造成误操作。
6.一级罐接种时，接种人员操作失误或者未按接种流程执行，从而造成小罐染菌。
7.消毒工理论知识薄弱，不能很好理解无菌概念。
8.对本岗位设备、管路、各阀门的作用不熟悉。
9.不及时学习相关技能，得过且过。
10.造成染菌原因分析。
机
1.设备老旧，夹层或者蛇皮管容易穿孔砂眼造成染菌隐患。
2.机械密封泄漏易造成染菌。
3.整个公共系统可能存在交叉污染，需要技术改进。
4.蒸汽压力低或者波动较大，存在染菌隐患。
5.空气压力波动较大且管路灰尘较多，造成空气膜过滤器失效，从而造成染菌。
6.空气温度较低，水分较高造成造成空气膜过滤器失效，从而造成染菌。
7.空压机漏油导致空气中有油污。
8.空气分布管堵塞造成染菌。
9.由于标识不清，造成员工误操作，从而造成染菌。
10.加热时罐体震动较大，造成与罐相连接处焊口断裂。
料
1.消毒或者运行过程中泡沫较大，造成顶罐且有可能倒抽，从而造成染菌。
2.保压过程中，由于员工操作失误造成料液倒流现象，从而造成染菌。
3.料液中有结块现象造成消毒不彻底，从而造成染菌。
4.对发酵罐和附属设备进行全面清洗和检查，做到无死角以及无残留。
5.造成染菌原因分析。
4
法
1.SOP本身存在不合理部分，导致操作手法上就有染菌隐患。
2.公共系统检（如空气、蒸汽、移种管路等）没有定期检修或者没有相关的制度。
3.员工的考核办法不精准导致员工对于无菌意识淡薄。
4.管理人员没有检查落实无菌相关的事项。
5.理论与实操培训不到位，员工理解的模棱两可。
6.及时分析总结染菌的原因并总结教训。
7.要严格按标准操作规程执行并落实检查。
8.定期打压试漏，定时拆卸清洗。
环
1.接种周围环境卫生差，从而造成小罐染菌。
2.环境消毒未按规定执行，导致无菌样假样。
3.小罐接种环境内空气流动较大、门窗未关造成污染环境，从而造成染菌。
4.接种时火焰未覆盖茄子瓶周围，没有起到保护作用，从而造成染菌。
5.小罐罐体与地面夹缝太大、气流大污染小罐接种环境，从而造成染菌。
03
菌种组（人）
原材料要求：
1.水：按照SOP要求使用新鲜的一次水和无盐水。
2.保存：按照原材料保存要求进行储存。易变质的原材料一定要冷藏保存，豆粉应在冰箱间冷藏储存。
配料组（人）
1.基础料液结块，措施：在过滤器筛板前加细网。
2.原材料受潮变质，措施：发现原材料变质立即更换。
3.输料管道及输料过滤器存有残料发酵滋生杂菌。措施：每批清洗过滤器并用清水冲洗输料管道。（清洗过滤器时应先清净靠近配料罐挡板处料块及杂物，再抽出挡板清洗挡板）
4.培养基在配制罐内放置时间较长造成泡沫大。措施:1.通知无菌室在工艺要求的范围内增加消沫剂的加量。2.通知消毒岗位相关人员。
5.配料岗位设备维护要求：配制罐及过滤器每批清洗，发现过滤器筛板或丝网又破损及时维修更换。
看罐组（人）
1.人员控制中出现异常：保证所负责看罐均处于受控状态，中罐及时进行升降温，既要保证种子液生长良好，又要防止移种前顶罐造成大罐前期染菌，大罐液面要控制在一定高度，及时加剂或带放防止顶罐形成倒吸。
2.体积大、液面高、泡沫顶罐：一般采用带放来控制液面。
3.泡沫大时：加剂要按少量多次的原则，特别在中后期罐的操作中，要勤察看发酵罐液面，发现液面上涨即可少量添加液体消沫剂，将液面控制在一定高度，不得使液面顶罐，以免造成染菌或逃液。
4.看罐岗位设备卫生要求：大中小罐随时保持洁净，发现泄漏及时通知相关人员，设备区地面保证无积水，了解大罐设备防护知识，能对减速机异常运行检查，能发现补料异常情况，能正确使用设备仪表。
3.
无菌组（人）
1.取样操作时先将取样管道内的存积料液放净，除去偶然性操作引起的误差外，确保所取的无菌样均能够反映发酵罐真实纯种发酵培养状态,所取生化样确实能够体现罐内培养实时理化特征；
2.控制恒温室温度稳定在37±2ºC，以稳定无菌样培养的条件；
3.严格按照SOP要求控制无菌培养基的制备，确保其在有效期内使用，并按质保部要求定期进行验证，保证生产无菌试验有效；无菌操作中是否出现于SOP 不相符的现象；每班定期检查无菌样品，无菌样品出现异常后及时正确判定所污染菌型；
4.所用各类染色剂及试剂均需保证在有效期内使用，常用pH缓冲液更要保证以使用情况为准随用随换，保证pH测量的准确；
5.定期更换浸泡载玻片的酒精，避免长时间使用使得载玻片附着物影响镜检结果，无菌检测物品按SOP操作确保无菌试验结果判断。
6.放罐后将无菌样再次加做片子镜检，以核实染菌罐所染菌型，针对其进行染菌分析；
7.无菌判定要准确及时，可避免已染菌种子罐进入下一级罐造成损失。
机修组（人）
1.发酵车间所用管线、法兰等原料的进货质量必须达到国标要求。
2.焊条的材质必须与焊接设备的材质一致。
3.碳钢与不锈钢焊接必须用不锈钢焊条。
4.管线与设备、管线与管线等焊接不能存在夹缝、夹层、死角、盲端，必要时可割去焊缝处部分材料，添加同样大小、材质的材料进行补焊。
5.机械密封检修必须保证严密无泄漏。
6.造成染菌原因分析、控制措施。
物料处理（料）
1.培养基分装后及时进行消毒，减少存放时间；灭菌后存放于储物间。
2.严格按照灭菌程序进行灭菌，冬天注意培养基升温50-80度时间保证2min，打向灭菌到100度时注意排冷气时间，缓慢关小冷排气。
3.冰箱间的冰箱内部每周用消毒剂进行清洁处理。
主发酵设备（机）
1.日常维护，每天清理锅内卫生，注意排水过滤网上不能有异物。
2.每季度拆开排气管道进行清理，保证排气管路畅通。
3.验证灭菌柜的灭菌效果，发现问题及时解决。
4.保证密封圈完好，压力表、温度表完全对应。
洁净区（环）
1.按照洁净区环境控制管理制度定期或不定期的进行微生物、尘埃粒子数、温湿度、净压差、高效过滤器的检漏，发现异常情况及时反映并处理。
2.洁净区的进回风口、墙壁、顶棚定期清洁，同时保证完好。
3.检测双碟上出现芽孢杆菌时，停止使用接种间，立即使用甲醛对接种间进行熏杀。
4.根据生产需要对接种间采用甲醛熏杀。
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空气系统（机）
1.防止空气净化系统带菌的主要措施有提高空气进口的空气洁净度；除尽压缩空气中夹带的油和水,保持过滤介质的除菌效率。现在空气系统应该有了很大的进步，不存在油的问题，但在夏秋两季，由于空气湿度较大可能出现预过滤器放出水的现象，因此各个车间应根据车间情况，定时放水。在过滤器灭菌时要防止过滤介质被烧灼,还要防止发酵液倒流入空气过滤器内。
2.空压机、车间空气湿度要求：小于60%（根据季节及空气温度及时调节空压机出口温度）。
3.种子室操作间空气湿度、温度要求：小于60%（包括超净工作台）。
4.造成染菌原因分析、控制措施
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蒸汽系统(机）
1.蒸汽的含水量：首先要重视蒸汽质量,一般采用饱和蒸汽,严格控制蒸汽中的含水量,按照不同灭茵工艺要求提供稳定的蒸汽压力,灭菌过程中蒸汽压力不可以大幅度的波动,以保证灭菌质量。
2.蒸汽的温度：130-150℃。
3.蒸汽的压力：必须保证蒸汽调节阀后蒸汽压力在0.3-0.4Mpa之间恒定。
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1.靠罐阀门每批必须检修。
2.运转过程中阀门、阀兰垫渗漏检修后必须进行消毒处理。
3.消毒蒸汽必须使用饱和蒸汽。
4.洗罐必须做到罐壁、搅拌轴、搅拌叶无料液、空气分布管无结块。
5.机械密封进罐后必须保证严密无泄漏。
6.排气、排污管道不应相互串连在一起。
7.总蒸汽管和分蒸汽管应大小不一样，避免灭菌时造成“短路”。
8.原因分析：①从范围分析：单罐染菌从设备、操作上找原因，同时出现几批染菌罐应从系统中找原因；②从时间上分析，前期染菌一般杂菌量大，应从物料消毒不彻底、种子带菌、泡沫顶罐、渗漏方面找原因；③从菌型分析：染酵母菌、霉菌由于其不抗热，可从无菌室洁净情况，倒瓶、并瓶、设备渗漏上找原因；染球菌、杆菌从空气过滤介质失效、设备渗漏、物料倒流上找原因；染芽孢杆菌等抗热菌从死角、罐内洁净、设备装置、操作上找原因。
9.停、送空气、蒸汽按照车间应急措施执行。
10.蒸汽管线必须保温确保蒸汽质量。
11.菌种室器具必须灭菌彻底，坚持无菌间和无菌操作人员的菌落检测制度。
12.现阶段基本都直接从发酵罐直接取样。因取样量不同,影响颜色反应和浑浊程度的观察。如果连续3个时间的酚红肉汤无菌样发生颜色变化或产生浑浊,或斜面连续3个时间样品长出杂菌并要结合镜检确认连续3个时间样品染菌且菌型一致即判断为染菌。
13.避免取到假样。
14.小罐接种前必须提前30分钟进行环境消毒后方能接种。
15.定期拆洗泵前过滤器，拆除过滤器内结块、线绳等废物，防止杂菌繁殖。
